Este método visa avaliar como as substâncias de teste podem causar danos às células. Para isso, utiliza-se o ensaio de citotoxicidade BALB/c 3T3 NRU, que avalia a integridade dos lisossomos. O Documento de Orientação OECD nº 129 (OECD, 2010) descreve o uso de métodos in vitro de citotoxicidade para estimar as doses iniciais para testes de toxicidade sistêmica oral in vivo. Assim, o valor do IC50 determinado in vitro é usado para estimar o LD50, que define as doses iniciais para ensaios de toxicidade sistêmica oral aguda in vivo conforme descrito nos métodos OECD TG 420 (toxicidade oral aguda – procedimento de doses fixas), OECD TG 423 (avaliação da classe tóxica aguda) ou OECD TG 425 (procedimento "UP and Down"). Este método é considerado adequado para integrar estratégias de teste de toxicidade oral aguda em humanos, sendo utilizado como teste de triagem para reduzir e refinar o uso de animais em pesquisa.